Western-Blot-Protokoll
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SDS-PAGEStellen Sie ein SDS-PAGE-Gel entsprechend dem Molekulargewicht (MW) Ihrer Zielproteine her. (Rezepte finden Sie im Abschnitt "SDS-PAGE-Gelrezepte")Bereiten Sie Proben im Mikrozentrifugenröhrchen vor. Fügen Sie vier Mal Probenpuffer hinzu, so dass die Gesamtproteinmenge etwa 30 - 50 ug je Probe beträgt (entsprechend der Proteinmenge, die durch den Bradford- oder BCA-Test gemessen wird).Flicken Sie die Mikrozentrifugenröhrchen um die Proben zu mischen, drehen Sie sie kurz und erwärmen Sie sie anschließend 5 Minuten lang auf 95 - 100 ° C.Stellen Sie das Elektrophorese-Gerät auf und tauchen Sie es ein Mal in den Laufpuffer ein. Entfernen Sie die Gelkämme und reinigen Sie die Kavitäten von restlichem Stapelgel, indem Sie den Laufpuffer in jeder Vertiefung mit einer Gelfüllspitze auf und ab pipettieren (Abbildung 1).Legen Sie Proben und geeignete Proteinmarker mit einer Spitze auf das Gel.Setzen Sie den Deckel auf den Geltank. Schalten Sie das Elektrophorese-Gerät an und stellen Sie...